激光共聚焦显微镜
技术诀窍
如何改善图像质量
(扫描的图像)获取共焦图像的三个步骤
如何改善图像质量
用水银灯扫描
LSM 缩写
LSM 术语
1. “更多信号!”
    • 通过减慢扫描速度来调节较长的像素静置时间
    • 使用“平均”方法:计算连续的“线”或“帧”扫描的“合计”或“平均”像素值。
    • 增加发射滤镜的带宽(例如,LP 而非 BP)。
    • 加大针孔直径;
    注意:光学切片的厚度也会相应地增大。
    • 增大激发能(激光功率);但是,请注意漂白效应、饱和效应和光毒效应。
2. “更多细节!”
    • 使用较高数值孔径 (NA) 的物镜;
    x/y 分辨率 ~ 1/NA,z 分辨率 ~ 1/NA2。
    • 增加“帧大小” = 每条线的像数值 + 每帧的线条数,例如,1024 x 1024 或 2048 x 2048(最小值为 4 x 1)。
    • 优化扫描焦距 (Z),即像素大小 < 或 = 0.25 x 艾里斑直径
    (例如:M = 40x,NA 1.3, l= 488 毫微米 => Z
    = 6)。
    • 增加动态范围(从 8 更改为 12 位/像素)。
3. “更可靠!”
    • 使用多轨:可非常快速地切换激励波长;避免信道之间的信号道间串扰;
    提供预定义配置。
    • 使用 ROI (研究区)功能:大大减少样本的受激区域,并以常数 SNR增加采集率;
    可同时定义和使用任何形状的多个研究区。
LP:Long pass
BP:Band pass
NA:Numerical aperture
ROI:Region of Interest
SNR:Signal-to-Noise Ratio