激光共聚焦显微镜
技术诀窍
获取共焦图像的三个步骤
With Zeiss LSM 5 PASCAL / LSM 510 / LSM 510 META获取共焦图像的三个步骤
如何改善图像质量
用水银灯扫描
LSM 缩写
LSM 术语
(LSM software running, lasers and HBO turned on)
1. 在 VIS 模式中观察样本
使用双目显微镜在外荧光模式下聚焦样本,并定位到物体中心部位;通过软件(“显微镜控制”窗口)根据用途(例如,FITC 或 Cy3)选择荧光滤镜组件;将观察视野相匹配:调节到适当的物镜放大率(考虑使用正确的油浸介质)。
2. 装入 LSM 配置
转至 LSM 模式(操作观察管滑块或软件)。打开“配置控制”窗口,单击“存储/应用”,并从列表(单轨/多轨)中选择预定义的配置。单击“应用”,将自动设置系统:激光波长,衰减装置,滤镜 (EF),分束镜 (MBS、SBS),针孔直径,检测器设置(信道、增益、静差)。
或者:单击“重新使用”按钮(存储的图像/图像数据库窗口),以恢复上一实验的设置值。
3. 扫描图像
单击“查找”按钮(“扫描控制”窗口中的右行)
=> 系统将自动打开图像窗口,优化检测器设置(将 PMT 增益及静差与8 或 12 位/像素的动态范围及信道相匹配),然后立即扫描图像!
有关扫描切片、时间序列等的详情,请参见操作手册。
EF:发射滤镜
MBS:主分束镜
SBS:次分束镜
PMT:光电培增管