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Producto

ZEISS LSM 990 Spectral Multiplex

Captura de imágenes de multifluorescencia para comprender en profundidad la biología espacial

LSM 990 Spectral Multiplex destaca en la separación espectral de marcadores fluorescentes. Optimice sus experimentos avanzados de multiplexación espectral con un gran número de marcadores de proteínas y una clara separación de las señales de fluorescencia, al tiempo que elimina de forma fiable la autofluorescencia. Aumente su productividad con un sistema que proporciona unas condiciones óptimas para la captura de imágenes, la identificación inmediata del colorante y unos flujos de trabajo optimizados desde la adquisición hasta el análisis.

  • Información espectral de 380 a 900 nm tomada en un solo escaneo
  • Domine fácilmente la captura de imágenes espectrales personalizada
  • Separación fiable de señales fluorescentes
  • Automatización del flujo de trabajo más allá de la captura de imágenes

Multiplexación espectral eficiente

Obtenga toda la información espectral en un solo escaneo de imagen

LSM 990 Spectral Multiplex ofrece una productividad incomparable para sus complicados experimentos de captura de imágenes espectrales, ya que cubre un rango de longitudes de onda de 380 a 900 nm. Las opciones de diseño inteligente de la trayectoria del haz eliminan las concesiones relacionadas con la separación espectral, la sensibilidad, la velocidad, la relación señal-ruido y la resolución. Con la adquisición directa por la vía lambda, puede separar simultáneamente diez o más marcadores individuales. La captura de todos los espectros en un solo escaneo permite separar al instante y visualizar en tiempo real los canales resultantes. De este modo podrá identificar un gran número de marcadores en muy poco tiempo, lo cual resulta útil cuando se necesita una mayor resolución espacial o para capturar imágenes de grandes volúmenes o muestras vivas. Las señales no deseadas, como la autofluorescencia, pueden eliminarse fácilmente sin suprimir de forma inadvertida la verdadera señal de las proteínas diana. Toda la información lambda se conserva y los espectros se muestran en gráficos fáciles de leer que le ayudarán a determinar si está capturando los marcadores fluorescentes esperados.

13 colores más autofluorescencia adquiridos a la vez

Izquierda: Imagen espectral (lambda stack) de 13 marcadores adquiridos simultáneamente, representación en color real. Derecha: imagen segregada de 13 marcadores sin autofluorescencia, procesamiento con LSM Plus.

Izquierda: Imagen espectral (lambda stack) de 13 marcadores adquiridos simultáneamente, representación en color real. Derecha: imagen segregada de 13 marcadores sin autofluorescencia, procesamiento con LSM Plus.

Muestra cortesía de Michal Skruzny, ZEISS Microscopy GmbH.

Marcadores únicos segregados y autofluorescencia

Marcadores únicos segregados y autofluorescencia.

Los 13 espectros y el espectro de autofluorescencia se definieron en muestras marcadas con 4 colorantes para permitir la separación espectral y obtener espectros limpios. 5 líneas láser y espectros de excitación (panel superior), espectros de emisión (panel inferior).

Los 13 espectros y el espectro de autofluorescencia se definieron en muestras marcadas con 4 colorantes para permitir la separación espectral y obtener espectros limpios. 5 líneas láser y espectros de excitación (panel superior), espectros de emisión (panel inferior).

Imagen de folleto de producto de ZEISS LSM 990 Spectral Multiplex

ZEISS LSM 990 Spectral Multiplex

Captura de imágenes de multifluorescencia para comprender en profundidad la biología espacial

Diseño para experimentos fácil de usar

Personalice sus experimentos espectrales con facilidad.

Al iniciar un experimento multicolor, Smart Setup ofrece datos de excitación y emisión para una gran variedad de fluoróforos. Adapte todo el sistema a sus necesidades con un solo clic eligiendo entre las opciones de configuración para lograr una separación espectral óptima, la máxima velocidad o el oportuno equilibrio. También puede seleccionar sin complicaciones el modo Lambda Scan para capturar todas las señales relevantes del rango espectral deseado en un solo barrido. Podrá guardar todos los ajustes experimentales y acceder a ellos fácilmente desde ZEN, lo que facilitará una utilización más rápida de las configuraciones personales de los experimentos. Integre la función LSM Plus para garantizar una relación señal-ruido óptima y una resolución espacial mejorada sin ralentizar su experimento.

Separación directa de GFP y RFP de la autofluorescencia en Arabidopsis

Hoja de Arabidopsis con expresión de GFP-HDEL (que marca el retículo endoplásmico) y ST-mRFP (que marca los cuerpos de Golgi). El lambda stack de 32 canales espectrales adquirido simultáneamente muestra claramente el rango de color espectral de cada píxel.

Hoja de Arabidopsis con expresión de GFP-HDEL (que marca el retículo endoplásmico) y ST-mRFP (que marca los cuerpos de Golgi). El lambda stack de 32 canales espectrales adquirido simultáneamente muestra claramente el rango de color espectral de cada píxel.

Muestra cortesía de Verna Kriechbaumer, Oxford Brookes University, Reino Unido

Canales individuales del lambda stack de 411 a 740 nm

Canales individuales del lambda stack de 411 a 740 nm.

Izquierda: Los espectros de GFP (verde), mRFP (rosa) y autofluorescencia de clorofila (blanco) definidos a partir del lambda stack permiten distinguir inmediatamente los diferentes marcadores y la autofluorescencia en la imagen, incluso durante la captura de imágenes, y separarlos. Derecha: Imagen segregada y procesada con LSM plus (verde: GFP/ER, rosa: mRFP/cuerpos de Golgi, blanco: clorofila).

Izquierda: Los espectros de GFP (verde), mRFP (rosa) y autofluorescencia de clorofila (blanco) definidos a partir del lambda stack permiten distinguir inmediatamente los diferentes marcadores y la autofluorescencia en la imagen, incluso durante la captura de imágenes, y separarlos. Derecha: Imagen segregada y procesada con LSM plus (verde: GFP/ER, rosa: mRFP/cuerpos de Golgi, blanco: clorofila).

Segregación espectral en tiempo real

Separe sus marcadores fluorescentes de forma rápida y fiable

La opción de segregación espectral está siempre disponible cuando se capturan imágenes de varios canales o se utiliza el modo lambda. Los espectros guardados previamente pueden recuperarse de una base de datos local y, junto a esta información, se almacenan y muestran todos los ajustes importantes de la captura de imágenes. Es posible seleccionar a mano los píxeles con información espectral de la imagen recién adquirida, o utilizar la función integrada de extracción automática de componentes para identificar dichos píxeles. Estas fuentes de información pueden combinarse en un proceso de segregación lineal. Las imágenes multicanal resultantes pueden someterse a validación y control de calidad, y es posible guardar un canal «residual» opcional junto a los datos originales para llevar un registro perfecto del experimento. Realice la segregación lineal sobre la marcha a la vez que captura la información espectral en escaneos únicos a través del Online Fingerprinting (identificación dactilar en línea), y obtenga inmediatamente señales separadas, lo que resulta ideal para grandes volúmenes y para el cribado de combinaciones específicas de marcadores fluorescentes.

Huella digital en línea de células vivas de 5 colores de células epiteliales de riñón de cerdo

Células LLC-PK1 (línea celular epitelial de riñón de cerdo) que expresan Tubulina-mEmerald (tubulina, cian) y H2B-mCherry (ADN unido a histonas, blanco), marcadas adicionalmente con Mitotracker Orange (mitocondrias, amarillo), SiR-Actina (actina, rosa) y DOPE-ATTO 740 (vesículas, naranja). Captura de imágenes de células vivas (cámara rápida) con 5 colores capturadas simultáneamente y segregadas en tiempo real utilizando huella digital en línea, procesada con LSM Plus.

Automatización del flujo de trabajo más allá de la captura de imágenes

Aumente su productividad optimizando los experimentos polifacéticos

Combine todos los métodos de obtención de datos espectrales disponibles, incluidos los escaneos lambda, la segregación lineal y LSM Plus para mejorar la relación señal-ruido (SNR), en un único pipeline de procesamiento que ejecute todos los pasos de los experimentos multidimensionales. Los flujos de trabajo automatizados para la multiplexación espectral que implican múltiples rondas de tinción y captura de imágenes pueden simplificarse con sistemas automatizados de suministro de líquidos. Las rondas individuales de tinción, captura de imágenes, blanqueamiento y stripping pueden organizarse dentro de ZEN.1 Transfiera los datos resultantes a ZEISS arivis pro para el registro en 3D de los datos de multiplexación espectral, la segmentación de objetos AI o los análisis estadísticos, como los análisis de vecindad de celdas y de reducción de dimensionalidad.

Sección del cerebro de un ratón

Flujo de trabajo de multiplexación espectral desde la detección de muestras hasta el procesamiento de datos de imágenes

Cerebro de ratón fijado, secciones de 40 µm de grosor. DAPI (núcleos), MAP2-A488 (dendritas y cuerpos neuronales), Parvalbumin-A568 (subtipo de interneurona inhibitoria/GABAérgica), Iba1-A647 (microglía, las células inmunitarias residentes en el cerebro), VGAT-750 (terminales presinápticas de interneuronas inhibitorias/GABAérgicas).

La vista general se capturó con ZEISS AI Sample Finder, y luego se añadieron vistas generales de las secciones utilizando un objetivo de 10x, una Axiocam 705 e iluminación LED. Los escaneos detallados se obtuvieron utilizando el objetivo Plan-Apochromat 63×/1,4 aceite. Se configuró un Lambda scan utilizando los 405, 488, 561, 639 y 730 nm, con 35 detectores que cubren el espectro de 411 a 900 nm. Para segregar las imágenes se utilizaron los espectros de los 5 marcadores, más un espectro de autofluorescencia del tejido obtenido a partir de tinciones individuales. Las imágenes se procesaron con LSM Plus.

Muestra cortesía de Luisa Cortes, Centro de Microscopia de Imagem de Coimbra, CNC, Universidad de Coimbra, Portugal

Microscopía multiespectral: Detalles sobre la tecnología

Investigue más proteínas en paralelo: Sistema optimizado para la eficiencia lumínica

Para conseguir una captura de imágenes delicada y óptima con múltiples marcadores, es fundamental que todos los componentes del sistema de captura de imágenes funcionen conjuntamente para maximizar la transmisión de la luz de emisión. LSM 990 Spectral Multiplex incluye una configuración del detector y un diseño de la trayectoria del haz que le permiten conservar la valiosa señal e ir más allá de la captura de imágenes multicolor convencional.

  • Si necesita disponer de la flexibilidad necesaria para registrar dos marcadores simultáneamente o realizar un sofisticado experimento de multiplexación espectral, el proceso comienza con los divisores de haces principales (MBS) de ángulo bajo que garantizan una separación limpia de la luz de excitación láser de las señales de emisión, lo que permite aprovechar al máximo la luz de emisión sin pérdida de señal.
    El acoplamiento láser de ZEISS LSM 990 está diseñado para adaptarse a un amplio rango de longitudes de onda de excitación de 405 nm a 730 nm, e incluye además la opción de excitación multifotónica a través de dos vías independientes ajustadas a la longitud de onda y ópticas de colimación adicionales. Todos los elementos ópticos de la trayectoria del haz de emisión están diseñados para lograr una transmisión óptima del rango espectral de emisión de 380 nm a 900 nm, guiando la luz a través de un pinhole apocromático, controlado por bisagras de estado sólido sin desgaste.
    Una rejilla holográfica garantiza la separación espectral lineal de toda la señal de emisión. Esto es fundamental, ya que garantiza que los 32 canales del detector capten la misma anchura espectral, proporcionando una resolución espectral constante de 10 nm para una segregación espectral eficaz y una definición precisa del rango de detección.

  • Eficiencia cuántica (QE) espectral habitual de los detectores ZEISS LSM 990
    Eficiencia cuántica (QE) espectral habitual de los detectores ZEISS LSM 990

    Eficiencia cuántica (QE) espectral habitual de los detectores ZEISS LSM 990

    Eficiencia cuántica (QE) espectral habitual de los detectores ZEISS LSM 990

    LSM 990 Spectral Multiplex puede equiparse con un detector GaAsP de 32 canales, que se complementa con dos detectores laterales y dos detectores NIR GaAs y GaAsP opcionales. Esta configuración única proporciona el mayor número de detectores disponible en los sistemas LSM.

    Los detectores están situados estratégicamente dentro del diseño del cabezal de escaneo para maximizar la eficiencia cuántica y garantizar una conversión óptima de la luz en señales electrónicas para las longitudes de onda de emisión pertinentes. Todos los detectores están linealizados para garantizar datos cuantificables. Todos los detectores están calibrados entre sí, lo que permite que las señales espectrales se visualicen de forma coherente con las bases de datos espectrales. Esta función simplifica la identificación de los espectros de fluoróforos y la validación de los datos.

    Para mejorar la conservación de los fotones, LSM 990 incorpora un bucle de reciclado que se ocupa de la posible pérdida de luz en la rejilla holográfica. Aplicando principios físicos, cualquier luz que no se separe espectralmente sale de la rejilla con un ángulo ligeramente diferente y entra en el bucle de reciclado, donde se altera su polarización mientras se guía de nuevo por la rejilla. Este proceso concede a la luz una segunda oportunidad de salir de la rejilla hacia los detectores disponibles.

  • Cuando los detectores han captado toda la luz de emisión, cualquier imagen multicolor adquirida puede someterse a un procesamiento posterior de separación espectral. Las imágenes multicanal y lambda se procesan de forma similar, con una segregación espectral que utiliza sistemáticamente opciones de procesamiento sólidas. La información espectral para la segregación puede seleccionarse de forma manual en la imagen actual, extraerse automáticamente con ayuda del software (ACE) o puede existir ya en la base de datos espectral. Todos los espectros pueden guardarse en la base de datos para futuras referencias, lo que permite mantener cierta organización mediante los nombres elegidos, los ajustes del experimento y las previsualizaciones espectrales.

    La separación espectral emplea un sofisticado algoritmo de segregación lineal, que incorpora de forma opcional distintas formas de segregación ponderada que tienen en cuenta las características de la luz, como el ruido de la captura. Cabe destacar que el canal residual sirve como opción directa de control de calidad para cualquier proceso de segregación lineal. Gracias a la clara visualización de los datos espectrales, a las opciones avanzadas de segregación lineal y al canal residual, podrá lograr que sus experimentos espectrales cumplan sus estándares de calidad.

    Al optimizar el proceso experimental, es posible realizar toda la segregación espectral realmente sobre la marcha con la función Online Fingerprinting, que reduce el tiempo de procesamiento y los datos al proporcionar directamente todas las imágenes separadas. En el caso especial de los experimentos multidimensionales, como las combinaciones de Z-stacks, series temporales y posiciones múltiples para un mejor rendimiento, puede incorporarse la segregación lineal al pipeline de procesamiento creado por Direct Processing y combinarse directamente con LSM Plus para aumentar la resolución espacial y mejorar la relación señal-ruido de todas las imágenes.