ZEISS LSM 900 con Airyscan 2

Para minimizar el fotoblanqueo y el daño en una muestra viva, resulta útil reducir el tiempo de adquisición y utilizar la mínima potencia de láser. LSM Plus ayuda a mejorar la relación señal-ruido, así como la resolución de estructuras como las fibras fusiformes.

En este ejemplo, se adquirieron 100 z-stacks con LSM 900 en Celldiscoverer 7 durante un plazo de 29 minutos. Las imágenes muestran una proyección de máxima intensidad de 38 planos z. Células con expresión de H2B-mCherry (rojo) y α-tubulina-mEGFP (cian).

LSM Plus ayuda a mejorar la relación señal-ruido cuando se obtienen imágenes de grandes volúmenes que se van a renderizar en 3D. Visualización de la vasculatura (verde) y glóbulos rojos (magenta) mediante expresión de indicadores transgénicos, vista lateral, anterior a la izquierda.

Se captaron imágenes de una pila Z de 300 µm con 81 planos sobre tres mosaicos con la aplicación de LSM Plus. Los mosaicos se unieron y renderizaron en 3D con ZEN – powered by arvis^®.

Muestra cortesía de B. Schmid, DZNE Múnich, Alemania

Las imágenes fueron captadas con LSM 900 en ZEISS Celldiscoverer 7 usando detectores confocales GaAsP (fila superior) y Airyscan 2 en el modo HS (fila inferior). Imágenes confocales con LSM Plus (arriba, derecha) con mejor relación señal-ruido y una mayor resolución de las estructuras mitocondriales. Airyscan Joint Deconvolution (abajo, derecha) resuelve la arquitectura de la membrana interna y externa aún mejor en comparación con Airyscan HS (abajo, izquierda). Con tinción para la proteína Tom20 de la membrana mitocondrial externa (verde, Alexa Fluor-488) y la proteína ATP5a de la membrana mitocondrial interna (magenta, Alexa Fluor-647).

Migración del primordio de la línea lateral y deposición de neuromastos inmaduros en un embrión de pez cebra (Danio rerio). Se anestesió a los animales y se les integró usando agarosa de baja concentración en una placa de Petri con base de cristal. La captura de imágenes inicial mediante cámaras permitió una navegación rápida y fácil de la muestra (arriba) en combinación con el contraste con gradiente de fase con adquisición de imágenes mediante fluorescencia. Después se llevó a cabo la captura de imágenes de alta resolución con Airyscan 2 en modo Multiplex en posiciones individuales identificadas en la imagen widefield (cuadros blancos). La adquisición de imágenes rápida y cuidadosa inherente del modo Multiplex de Airyscan 2 es muy beneficiosa para este tipo de aplicación. No se molesta al animal durante la captura de las imágenes, además de que se pueden tomar imágenes con una relación señal-ruido muy elevada y con un gran nivel de detalle al mismo tiempo.

Línea A549 de células epiteliales de pulmón humano teñidas con Mitotracker Orange (mitocondrias) y SIR-DNA (núcleos).

La adquisición de imágenes combina de forma fluida dos modos de captura de imágenes: los canales de fluorescencia donde se capturaron imágenes en modo confocal usando detectores de GaAsP de alta sensibilidad, mientras que el contraste con gradiente de fase se realiza mediante cámara.

Se obtuvo una captura a cámara rápida de 2,5 h usando un aumento de 40× con una apertura numérica de 0,95.