ZEISS Dynamics Profiler​
Producto

ZEISS Dynamics Profiler​ Su acceso fácil a la dinámica molecular subyacente en las muestras vivas​

Descubra la concentración, la difusión asimétrica y la dinámica del flujo moleculares de las proteínas fluorescentes en sus muestras vivas mediante una única y sencilla medición. Desarrolle un perfil más profundo de las moléculas en sus experimentos actuales, desde cultivos celulares hasta organoides y organismos enteros.

  • Acceso notablemente fácil a la dinámica molecular​
  • Percepciones más profundas de sus muestras vivas​
  • Nuevos descubrimientos mediante el análisis de la difusión asimétrica y del flujo​

Añada una nueva dimensión a la captura de imágenes de muestras vivas​

Vea ZEISS Dynamics Profiler en acción​

Correlación de la interfaz de usuario de Dynamics Profiler

Acceso notablemente fácil a la dinámica molecular​

Mediciones guiadas por asistente con control de calidad integrado​

Los experimentos de la dinámica molecular suelen verse limitados por la falta de equipos o de personal altamente cualificado. Ahora, con la función Dynamics Profiler que puede incorporarse fácilmente a un confocal de ZEISS con el detector Airyscan, cualquier usuario experto en microscopía confocal puede llegar más allá de las imágenes confocales tradicionales para recopilar información sobre la concentración y la dinámica moleculares de una proteína de interés. El flujo de trabajo guiado por asistente garantiza una configuración precisa de la captura de imágenes y un control sencillo de la calidad de los datos. Las imágenes de referencia facilitan el contexto de la muestra y la documentación de la posición de la medición. La visualización inteligible de los datos permite un acceso intuitivo a la información obtenida.

Difusión asimétrica mediante el detector Airyscan

Nueva información a partir de sus muestras vivas​

Incorpore mediciones de la dinámica a sus experimentos actuales​

Antes, los usuarios de microscopía confocal aplicaban técnicas como la recuperación de fluorescencia tras fotoblanqueo (FRAP) para medir la dinámica molecular a pesar de las limitaciones, como por ejemplo, que cada muestra puede medirse una sola vez y los niveles fototóxicos de exposición lumínica. La espectroscopia de correlación de fluorescencia (FCS) tradicional podía utilizarse para medir con precisión las concentraciones de proteínas fluorescentes, pero requería equipos adicionales y podía resultar difícil, incluso para usuarios experimentados. Dynamics Profiler es la primera herramienta con una interfaz intuitiva y fácil de usar que proporciona acceso directo a estos datos de forma simultánea durante los experimentos mediante captura de imágenes confocales con una baja inversión de tiempo y luminosidad. Desarrollado a partir de la FCS, permite estas mediciones de forma inigualable, incluso en muestras luminosas y complejas.

Flujo de la interfaz de usuario de Dynamics Profiler

Acceso a nuevos descubrimientos moleculares​

La información correlativa espacial facilita los análisis de difusión asimétrica y flujo​

Con la FCS tradicional, las mediciones moleculares están limitadas a un solo volumen de excitación. Al utilizar el detector de área Airyscan, Dynamics Profiler incorpora información espacial, lo que permite nuevos análisis del perfil molecular en profundidad mediante mediciones únicas. La herramienta de difusión asimétrica puede captar un comportamiento asimétrico de la difusión dentro de una única función de dispersión puntual, como en la interfaz de la separación de fases líquido-líquido que da lugar a condensados celulares. La herramienta de análisis de flujo mide la velocidad y la dirección de las moléculas fluorescentes dentro de un solo volumen de excitación, lo cual es perfecto para medir el movimiento activo de las soluciones, como los procesos biológicos en el torrente sanguíneo o en sistemas microfluídicos, como los órganos sobre chip. Los datos brutos de cada medición están disponibles para posteriores análisis personalizados.

Principio de Dynamics Profiler

Detalles sobre la tecnología​

Airyscan permite realizar pruebas complementarias mediante FCS con muestras más luminosas y aporta nueva información espacial​

La espectroscopia de correlación de fluorescencia (FCS) es un método consolidado para examinar características moleculares. Si bien se trata de un método preciso y muy sensible, tradicionalmente está limitado a niveles de expresión extremadamente bajos o a concentraciones moleculares que pueden estar muy por debajo de los niveles de expresión experimentales en las muestras vivas para investigación. ​

ZEISS Airyscan emplea de forma exclusiva todos sus elementos detectores para captar 32 trazados de intensidad individuales de FCS por cada medición. El valor medio de los 19 elementos interiores proporciona mediciones sólidas y fiables sobre la concentración y la dinámica moleculares, incluso en muestras luminosas. Además, el detector de área permite realizar diversos análisis espaciales de correlación cruzada utilizando combinaciones de elementos detectores individuales.

  • Medición de la concentración y la difusión​

    Los datos sobre la concentración y la difusión moleculares se recogen con los 19 elementos más recónditos del detector Airyscan. La lectura de detectores separados permite realizar mediciones a intensidades totales (luminosidad) mucho mayores de lo que permitiría la FCS convencional.​

  • Medición de la difusión asimétrica​

    El análisis de la difusión asimétrica se calcula mediante la correlación cruzada del elemento central del detector con los elementos de los anillos externos, lo que permite descubrir características heterogéneas dentro de un solo volumen de excitación. Esto resulta perfecto para examinar muestras como los condensados celulares.​

  • Medición del flujo​

    La correlación cruzada de los pares de detectores que están agrupados y alineados en múltiples direcciones a lo largo del volumen de excitación puede medir la velocidad y la dirección de las moléculas en movimiento, como los fluoróforos en los sistemas microfluídicos o dentro del torrente sanguíneo.​

ZEISS Dynamics Profiler en funcionamiento​

Ejemplos de aplicación de las mediciones de dinámica molecular​

Medición de la concentración de proteínas en Drosophila

Ejemplos de aplicación de las mediciones de dinámica molecular​

Medición de la concentración de proteínas en Drosophila

Muestra cortesía del Prof. Dr. Achim Paululat y el Dr. Christian Meyer, Universidad de Osnabrück, departamento de zoología y biología del desarrollo, Alemania​

Muestra cortesía del Prof. Dr. Achim Paululat y el Dr. Christian Meyer, Universidad de Osnabrück, departamento de zoología y biología del desarrollo, Alemania​

Compare las concentraciones de moléculas en diferentes células​

Las mediciones de la dinámica y la concentración de proteínas fluorescentes pueden agregarse sin esfuerzo a un experimento confocal. La muestra exhibe un embrión de Drosophila melanogaster que expresa la molécula indicadora mCherry bajo el control del potenciador cardíaco y hematopoyético del gen hand (Han y Olson, 2005), situado en el tercer intrón. La expresión de la molécula indicadora imita la expresión endógena del gen hand en el corazón y se mantiene durante toda la embriogénesis, tanto en los cardioblastos como en las células pericárdicas. Incluso con muestras luminosas como esta, Dynamics Profiler permite obtener datos de FCS contundentes y comparar concentraciones de moléculas en diferentes células.​

Imagen general mediante fluorescencia convencional (izquierda) y pilas z (centro); mediciones posteriores mediante Dynamics Profiler dentro del mismo embrión en el mismo sistema (derecha). El gráfico y la tabla de datos muestran los resultados de la medición a partir de cinco puntos diferentes.

Medición de la difusión molecular en el borde nucleolar

Determine los cambios dinámicos en el borde de los nucléolos​

Medición de la difusión molecular en el borde nucleolar

Muestras cortesía de P. Hemmerich y T. Ulbricht (Core Facility Imaging, Instituto Leibniz para el estudio del envejecimiento, Jena, Alemania)​

Muestras cortesía de P. Hemmerich y T. Ulbricht (Core Facility Imaging, Instituto Leibniz para el estudio del envejecimiento, Jena, Alemania)​

Determine los cambios dinámicos en el borde de los nucléolos​

Las células vivas U‑2 OS que coexpresan transitoriamente la proteína verde fluorescente potenciada (EGFP) tetramérica y la proteína nucleolar fibrilarina marcada con proteína roja fluorescente monomérica se sometieron a mediciones con Dynamics Profiler en el borde de los nucléolos, como se indica en la imagen confocal general.​

Mapas de calor polares: medición de la difusión asimétrica dentro del punto 1 (fila superior) y del punto 2 (fila inferior). Se determinó la dinámica molecular de la EGFP en el borde nucleolar.​

Gráficos: medición de la difusión asimétrica mediante la correlación de pares de los elementos internos de Airyscan a lo largo de seis ángulos dentro del punto 1 (izquierda) y el punto 2 (derecha).

Medición del flujo en los vasos sanguíneos del pez cebra

Mida la velocidad del flujo en los vasos sanguíneos de las larvas de pez cebra​

Medición del flujo en los vasos sanguíneos del pez cebra

Cortesía de V. Hopfenmüller, Instituto Leibniz para el estudio del envejecimiento; Instituto Fritz Lipmann (FLI), Alemania​

Cortesía de V. Hopfenmüller, Instituto Leibniz para el estudio del envejecimiento; Instituto Fritz Lipmann (FLI), Alemania​

Mida la velocidad del flujo en los vasos sanguíneos de las larvas de pez cebra​

La información espacial que proporciona el detector Airyscan permite realizar análisis para determinar la velocidad de flujo de las moléculas en la sangre. Se inyectó dextrano marcado con tetrametilrodamina (10 kDa, medición con Dynamics Profiler) y dextrano marcado con fluoresceína (40 kDa, marcación de vasos sanguíneos) en los vasos sanguíneos de una larva de pez cebra de 5 días de vida, y se incrustó en agarosa de bajo punto de fusión al 1 %. ​

Imagen de referencia y datos de Dynamics Profiler adquiridos con LSM 980 con Airyscan 2. La dirección y la velocidad del flujo molecular a través del vaso sanguíneo se midieron en dos puntos diferentes. Los gráficos (derecha) muestran las curvas de correlación de la medición dentro del punto 1: curvas de correlación de los ángulos seleccionados (arriba), resultados reales de velocidad y dirección del flujo derivados de las 6 correlaciones cruzadas a lo largo de tres ejes (abajo).

Descargas​

    • ZEISS Dynamics Profiler

      Your Easy Access to Underlying Molecular Dynamics in Living Samples

      Páginas: 6
      Tamaño de archivo: 2 MB
    • ZEISS Dynamics Profiler

      Follow dynamic biological processes and reveal spatial molecular characteristics

      Páginas: 16
      Tamaño de archivo: 3 MB

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