ZEISS Lightsheet 7

Rein de souris transparisé avec le protocole iDISCO et imagé dans du cinnamate d'éthyle avec les objectifs de détection ZEISS Lightsheet 7, 5× / 0,16 foc et Clr 20× / 1,0 nd = 1,53 (insert). La souris a été perfusée avec de la lectine de tomate conjuguée au DyLight 594 pour visualiser le système vasculaire et les glomérules (rouge). En vert : auto-fluorescence pour visualiser l'anatomie des tissus. L'imagerie 3D d'organes entiers et l'analyse de la taille et du nombre glomérulaires aident à mieux comprendre les mécanismes de diverses maladies rénales, par ex. néphropathie diabétique. Traité avec arivis Vision4D^® sur ACQUIFER HIVE.

Ensemble de données 3D d'une trachée de souris P10 affichant l'organisation anatomique des fibres nerveuses mécanosensorielles. Marquage : DAPI, collagène IV (anticorps Alexa 488), fibres sensorielles (souche reporter exprimant tdTomato, anticorps Alexa 555), protéine de neurofilament NF200 (fibres nerveuses myélinisées, anticorps Alexa 647).

L'échantillon a été transparisé dans PEGASOS (Jing et al., 2018, Cell Research) imagé dans du BB-PEG à RI = 1,54 avec les objectifs de détection respectifs 5× / 0,16 foc et Cl r 20× / 1,0 nd = 1,53. Ensemble de données au grossissement 5× : échelle de pixels 0,61 × 0,61 × 1,63 microns, mosaïque 3×3, zoom 1,5×, 1230 coupes en z, volume 2,57 × 2,58 × 2 mm. Ensemble de données au grossissement 20× : échelle de pixels 0,23 μm × 0,23 × 0,58 micron, mosaïque 1×5, zoom 1,0×, 4206 coupes en z, volume 2,0 × 0,45 × 1,82 mm.

La salamandre a la capacité remarquable de régénérer ses membres et sa moelle épinière. Les outils de génétique moléculaire permettent d'identifier les cellules souches responsables de cette régénération complexe, ainsi que les signaux de réponse aux blessures qui déclenchent leur prolifération. Cet avant-bras d'axolotl a été transparisé dans du cinnamate d'éthyle (Masselink, W. et al. Development 146, (2019)) et imagé avec un objectif de détection 5x / 0,16 foc à un indice de réfraction de 1,57. L'ensemble de données multi-mosaïque a été aligné, fusionné et reconstitué avec le logiciel d'imagerie ZEN et le logiciel arivis Vision4D® sur une plateforme de données ACQUIFER HIVE.

L'imagerie de cellules entières dans le cerveau humain est une tâche presque impossible, en raison de la morphologie extrêmement sophistiquée des neurones et de leur propagation dans tout l'organe. Les organoïdes permettent dans une certaine mesure de récapituler le cerveau humain, y compris la production de neurones à partir de cultures de cellules souches neuronales. Avec la compensation ECi, la morphologie neuronale peut être étudiée du niveau local au niveau global, ce qui ouvre des possibilités intéressantes pour étudier la morphologie neuronale en 3D.

Organoïdes neuronaux de 35 jours faiblement marqués avec GFP / tdtomato (3 % GFP et 3 % tdtomato) imagés avec un objectif Clr 20 × / 1,0 nd = 1,53.
Échelle de pixels : 222 × 222 × 567 nm.
Volume d'acquisition : 1,66 × 0,66 × 1,6 mm.

L'imagerie d'organes lymphoïdes intacts en 3D permet d'analyser et de quantifier la réponse immunitaire à l'infection virale. Les cellules T ont été transférées dans des souris hôtes de type sauvage avant la récolte. Le nœud a été nettoyé, fixé et transparisé à l'aide de Ce3D (Li et al. PNAS 163, 2017) avant l'imagerie à RI = 1,49 (ph 7) avec un objectif de détection 5× / 0,16 (volume 2,5 × 2,5 × 1,6 mm). L'image montre des cellules T CD8+ natives marquées au GFP (jaune), des follicules de cellules B sont marqués avec du B220 (cyan) et le réseau vasculaire du CD31 (magenta).

Une souris C57 BL6J a été perfusée avec du PBS et 4 % de PFA. Le cerveau a été coloré par perfusion de colorant Cell-Tracker™ CM-DiI, un colorant lipidique permettant de marquer les membranes vasculaires. L'échantillon a été transparisé en utilisant le protocole iDISCO +, équilibré dans du cinnamate d'éthyle en tant que RIMS final. Il a ensuite été imagé dans du cinnamate d'éthyle à RI = 1,565 avec un objectif de détection Fluar 2,5× / 0,12 dans une cuve Translucence Mesoscale Imaging Chamber.

L'image à haute résolution sur la droite a été acquise avec Clr Plan-Neofluar 20× / 1,0 Corr nd = 1,53. Le volume d'imagerie est de 13,1 × 13,1 × 6 mm à une résolution de pixels de 1,83 × 1,83 × 6,77 μm. Il a été acquis en environ 40 minutes en mosaïque de 4×4, et 866 coupes en z. Le volume des données est de 93 Go. Données traitées avec le logiciel d'imagerie ZEN et arivis Vision4D^® sur une plateforme de données ACQUIFER HIVE.

Le cerveau de souris PV-tdtomato a été transparisé en utilisant le protocole CLARITY avec une imagerie finale effectuée en EasyIndex à un indice de réfraction de RI = 1,46.

Le parvalbumine-Cre résulte de l'expression du marqueur tdtomato. La parvalbumine est exprimée dans une population d'interneurones dans le cerveau et dans les cellules de Purkinje dans le cervelet. L'ensemble des données du cerveau a été acquis sur ZEISS Lightsheet 7 avec un objectif de détection de 5x / 0,16 foc. Le volume d'imagerie est de 11 × 20 × 8,8 mm à une résolution de pixels de 0,91 × 0,91 × 5,35 μm (12028 × 22149 × 1621 voxels). Il a été acquis en mosaïque 6 × 10, 1621 coupes en z. Le volume de données est de 1,2 To (805 Go après l'assemblage). Les données ont été traitées avec le logiciel d'imagerie ZEN et arivis Vision4D^® sur une plateforme de données ACQUIFER HIVE.