Técnicas de EM de volumen

Array Tomography

Captura no destructiva de imágenes de volumen mediante microscopía electrónica de barrido estándar

Puede realizarse con SEM estándar
La captura de imágenes no destructiva preserva la muestra
Apto para flujos de trabajo correlativos

EM de volumen con Array Tomography

Los grupos de investigación con acceso a un SEM estándar y cierta formación en la preparación de muestras pueden explorar la EM de volumen (vEM) con Array Tomography (AT). En AT, las secciones en serie finas se cortan y se fijan a un portamuestras. Las secciones se captan con SEM y luego se reconstruyen digitalmente para crear un conjunto de datos en 3D. AT es especialmente adecuado para flujos de trabajo correlativos, por ejemplo, cuando las proteínas de interés se localizan primero mediante microscopía de fluorescencia. Una de las enormes ventajas de AT es que no destruye las secciones, por lo que pueden archivarse para su uso futuro.

Representación esquemática de un flujo de trabajo típico

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Una muestra sumergida en resina se divide en una matriz de secciones en serie con un grosor de entre 30 y 70 nm cada una, y se colocan en un portamuestras en el mismo orden en que se cortaron.

2

Cada sección en serie se examina con el microscopio electrónico de barrido (SEM).

3

Las imágenes de microscopio electrónico adquiridas se procesan y alinean digitalmente en un conjunto de datos en 3D. Los compartimentos celulares se pueden identificar y segmentar.

4

El conjunto segmentado de datos en 3D se puede visualizar, estudiar y analizar estadísticamente.

  
      Ejemplo de aplicación
      
    Reconstrucción en 3D de secciones en serie de nódulos radiculares con la distribución de plasmodesmos

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Cortesía de D. Sherrier, J. Caplan y S. Modla, Universidad de Delaware, EE. UU.

La relación simbiótica entre plantas y bacterias

Comprender el impacto de las bacterias de los nódulos radiculares en la salud y el estado de las plantas

La red radicular de una planta proporciona acceso al agua y los nutrientes, que son componentes cruciales para el crecimiento de cualquier planta. Explorar toda la red radicular, así como comprender la influencia de los microbios externos, es importante para mejorar la salud y el rendimiento de las plantas. Para investigar la relación simbiótica entre las plantas y las bacterias de los nódulos radiculares es necesario conocer la distribución de los nódulos radiculares y de las bacterias, y para comprenderla en detalle es fundamental combinar la evaluación estructural de alta resolución y la evaluación de la fluorescencia.

La tomografía de matriz correlativa permite la superposición de datos estructurales y de fluorescencia para poder visualizar la distribución de los nódulos radiculares y las bacterias.