ZEISS LSM 980 con Airyscan 2

LSM Plus mejora literalmente cualquier experimento confocal con facilidad, de forma independiente del modo de detección o del rango de emisión. Su deconvolución de filtro Wiener lineal prácticamente no precisa interacción y garantiza un resultado cuantitativo fiable. Al igual que en nuestro procesamiento con superresolución Airyscan de eficacia probada, la información subyacente de las propiedades ópticas se adapta de forma automática en función de la lente del objetivo, el índice de refracción y el rango de emisión.

Aplique LSM Plus sin ningún esfuerzo adicional y benefíciese de:

• Mejor relación señal-ruido con elevada velocidad de captura y baja potencia de láser, lo cual es especialmente útil para la captura de imágenes de células vivas con bajos niveles de expresión
• Mejor resolución de los datos espectrales con hasta 36 canales en un solo escaneo
• Más información espacial y una mejora de la resolución aún mayor para muestras claras que permite cerrar el pinhole del LSM
• Flujos de trabajo integrados para combinar las ventajas de LSM Plus con la captura de imágenes de superresolución de Airyscan

_{Leyenda: Cámaras ováricas de Drosophila teñidas para F-actina (faloidina, magenta) y DE-cadherina (cian). Cortesía de T. Jacobs, AG Luschnig, WWU Münster; con T. Zobel, Münster Imaging Network, Alemania}

Airyscan 2 es un detector de área con 32 elementos de detección dispuestos de forma circular. Cada uno de estos elementos actúa como un pequeño orificio y aporta información de muy alta resolución mientras toda la zona de detección capta más luz que el ajuste confocal estándar. De esta forma se obtiene una eficiencia lumínica mucho mayor y una información estructural mejorada.

La ampliación del rango espectral en el NIR le permite usar más marcadores en paralelo. Podrá visualizar estructuras adicionales con más tinciones en sus experimentos multicolor, ya que los detectores Quasar y NIR son compatibles con los experimentos espectrales con Multiplex. Los marcadores fluorescentes de NIR son menos fototóxicos para las muestras vivas, debido a que cuentan con una longitud de onda más larga. Esto le permitirá investigar muestras vivas durante periodos prolongados, limitando al mismo tiempo la influencia de la luz. Además, la luz de los rangos de longitud de onda más larga se dispersa menos por el tejido de la muestra, lo cual aumenta la profundidad de penetración.

Independientemente del objetivo que desee alcanzar con los marcadores de NIR, el detector de NIR de doble canal combina dos tecnologías de detección diferentes (GaAsP rojo ampliado y GaAs) para una precisión de hasta 900 nm.

Para separar incluso las señales muy solapadas o para eliminar la autofluorescencia, se puede realizar un escaneo lambda usando el rango de detección completo con hasta 36 detectores, minimizando la iluminación y el tiempo necesarios. Mejore la captura de imágenes espectrales en todo el rango de longitudes de onda, incluyendo huellas en línea, con LSM Plus.

El ejemplo muestra un músculo cremáster de murino, con marcado multicolor con Hoechst (azul), Prox-1 Alexa488 (verde), neutrófilos Ly-GFP, PECAM1 Dylight549 (amarillo), SMA Alexa568 (naranja), VEGEF-R3 Alexa594 (rojo), plaquetas Dylight 649 (magenta). Captado con detector GaAsP de 32 canales usando huellas en línea.

_{Leyenda: Comparación de la mejor relación señal-ruido antes y después del procesamiento con LSM Plus. Cortesía del Dr. S. Volkery, MPI para Biomedicina Molecular, Münster, Alemania}

La microscopía multifotón (microscopía con dos fotones, microscopía óptica no lineal, NLO) es un método de preferencia para la captura de imágenes no invasiva de tejidos profundos de muestras vivas o fijadas, especialmente en neurociencia. La microscopía multifotón le saca partido al hecho de que los tejidos absorben y dispersan en menor medida las longitudes de onda más largas (600-1300 nm), por lo que estas penetran a mayor profundidad en la muestra mientras siguen formando un punto focal. La energía necesaria para excitar un colorante fluorescente no la proporciona un solo fotón, sino dos fotones con la mitad de energía cada uno. La probabilidad de que dos fotones alcancen el fluoróforo al mismo tiempo solo ocurre en el punto focal. Es por ello que la luz de emisión se origina en el plano focal y se puede detectar de forma eficiente, generando una sección óptica al tiempo que omite un orificio.

_{Leyenda: diagrama de energía de microscopía de dos fotones}

La combinación de la iluminación del punto láser, el barrido lineal y los detectores que pueden captar la señal en el modo de recuento de fotones convierten a LSM 980 en algo más que un dispositivo de captura de imágenes:

• Espectroscopia de correlación de imágenes de barrido (RICS)
• Espectroscopia de correlación de fluorescencia (FCS)
• Espectroscopia de correlación cruzada de fluorescencia (FCCS)
• Transferencia de energía de resonancia de Förster (FRET)
• Recuperación de la fluorescencia posterior al fotoblanqueamiento (FRAP)
• Microscopía de tiempo de vida de fluorescencia (FLIM)

_{Leyenda: principio de la espectroscopia de correlación de fluorescencia (FCS). Trayectoria de una partícula fluorescente por el volumen de detección}